При производстве инсулина различные системы экспрессии генерируют «инсулиноподобные» примеси, от которых довольно трудно избавиться. В связи с этим очистку инсулина осуществляют в несколько этапов с помощью ортогональной хроматографии.
Как правило, на этапе захвата для выделения и концентрирования больших объемов продукта ферментации используется ионообменный хроматографический сорбент, обладающий большой связывающей способностью, хорошей устойчивостью к щелочам, длительным сроком службы и обеспечивающий высокую скорость потока. UniGel-80SP – сильнокислотный катионит, производимый компанией НаноМикроТех на основе высокопрочных монодисперсных полиметакрилатных микросфер (80 мкм) с порами среднего размера (1000 Å) – позволяет осуществлять эффективное улавливание инсулина при высокой скорости потока и низком противодавлении.
На этапе промежуточной очистки требуются сорбенты с высоким разрешением для удаления большого количества примесей как посредством ионообменной, так и обращенно-фазовой хроматографии. Широкое применение получили сорбенты на основе полистирол-дивинилбензола, такие как NanoSP (сильнокислотный катионит) от компании НаноМикроТех с размером частиц 15 или 30 мкм.
На этапе «тонкой» очистки наиболее предпочтительными являются сорбенты на основе силикагеля для обращенно-фазовой хроматографии. Хорошим примером может служить Uni® Insulin C8 от компании НаноМикроТех, поскольку этот сорбент высокоэффективен в плане удаления «инсулиноподобных» примесей.
Очистка инсулина деглудек:
|
K C8 10-100 |
Uni®Insulin C8 |
|
|
Неочищенный образец (%) |
96,4 |
|
|
Загрузка образца (мг/г) |
12,5 |
|
|
Чистота (%) |
99,01 |
99,07 |
|
Выход (%) |
67,0 |
70,8 |
Анализ инсулина деглудек:
Очистка рекомбинантного инсулина человека:
|
K C8 10-100 |
Uni®Insulin C8 |
|
|
Неочищенный образец (%) |
86,7 |
|
|
Загрузка образца (мг/г) |
8 |
|
|
Чистота (%) |
99,46 |
99,41 |
|
Выход (%) |
62,1 |
73,6 |
Применение сорбентов производства компании НаноМикроТех для очистки инсулина и его аналогов:
|
Инсулин и его аналоги |
Этап очистки |
Конкурентные преимущества продукции НаноМикроТех |
Результаты |
|||
|
Связывающая способность (мг/мл) |
Чистота исходного препарата (%) |
Чистота конечного препарата (%) |
Выход (%) |
|||
|
Инсулин гларгин |
Захват |
Высокая скорость потока; низкое неспецифическое связывание; высокая связывающая способность |
20 |
45,0 |
78,0 |
75,0 |
|
Промежуточная очистка |
Высокая жесткость; длительный срок службы; высокая устойчивость к щелочам и кислотам; высокое разрешение |
24 |
68,0 |
98,0 |
80,0 |
|
|
10 |
65,0 |
95,0 |
75,0 |
|||
|
«Тонкая» очистка |
Высокое разрешение; высокая жесткость; высокая эффективность колонок |
6 |
95,0 |
99,5 |
78,0 |
|
|
Инсулин детемир Инсулин деглудек |
Захват |
Высокая скорость потока; низкое неспецифическое связывание; высокая связывающая способность |
100 |
60,0 |
95,0 |
94,0 |
|
Промежуточная очистка |
Высокая жесткость; длительный срок службы; высокая устойчивость к щелочам и кислотам; высокое разрешение |
24 |
68,0 |
98,0 |
80,0 |
|
|
15 |
80,0 |
96,0 |
85,0 |
|||
|
15 |
60,0 |
95,0 |
80,0 |
|||
|
«Тонкая» очистка |
Высокое разрешение; высокая жесткость; высокая эффективность колонок |
15 |
95,0 |
99,0 |
80,0 |
|
|
Рекомбинантный инсулин человека |
«Тонкая» очистка |
Высокий выход |
8 |
86,7 |
99,4 |
73,6 |
Только для справки. Результаты получены на основе использования конкретного образца и стратегии очистки. Для получения дополнительной информации или помощи, пожалуйста, обращайтесь к нашим специалистам
